目錄 第一章 緒論
第一節 基因工程技術的發展史
一、理論上的三大發現
二、技術上的三大發明
三、基因工程技術誕生的標誌
四、基因工程技術的發展
第二節 基因工程藥物的發展現狀
一、基因工程製藥特徵
二、基因工程藥物的種類
第二章 基因工程的工具酶
第一節 限制性核酸內切酶
一、限制酶的命名原則
二、限制酶的分類
三、Ⅱ型限制酶作用性質
四、影響Ⅱ型限制酶的因素
第二節 DNA連接酶
一、DNA連接酶的作用
二、影響DNA連接反應的因素
第三節 DNA聚合酶
一、大腸埃希菌DNA聚合酶Ⅰ
二、Klenow大片段酶
三、耐熱的DNA聚合酶——Taq酶
四、T4噬菌體DNA聚合酶
五、逆轉錄酶
第四節 鹼性磷酸酶
一、防止載體自連
二、獲得5′末端磷酸基團標記的探針
第五節 末端脫氧核苷酸轉移酶
第六節 其他工具酶
一、ⅡS型限制酶
二、Cas核酸內切酶
三、Dicer酶
四、重組酶
第三章 基因工程的載體
第一節 克隆載體
一、質粒載體
二、噬菌體載體
三、黏粒載體
四、人工微小染色體
第二節 表達載體
一、原核表達載體
二、真核表達載體
第四章 目的基因的製備
第一節 化學合成法
第二節 基因文庫獲取法
一、基因組文庫的構建與篩選
二、cDNA基因文庫的構建與篩選
第三節 PCR技術法
一、已知基因全長序列
二、已知基因部分序列
第四節 電子克隆法
一、利用EST資料庫進行電子克隆
二、利用基因組資料庫進行電子克隆
三、全長cDNA的判斷
四、電子克隆基因的生物信息學分析
第五節 DNA誘變
一、定點突變
二、隨機突變
第五章 重組子克隆的篩選和鑒定
第一節 載體表型選擇法
一、抗藥性標記插入失活選擇法
二、β-半乳糖苷酶顯色反應選擇法
第二節 插入基因表型選擇法
第三節 電泳檢測法
第四節 核酸分子雜交檢測法
一、雜交方法
二、核酸雜交探針
第五節 免疫化學檢測法
一、抗體測定法
二、免疫沉澱測定法
第六節 轉譯篩選法
一、雜交抑制轉譯檢測法
二、雜交選擇轉譯檢測法
第六章 大腸埃希菌基因工程
第一節 外源基因在大腸埃希菌中高效表達的原理
一、啟動子
二、終止子
三、核糖體結合位點
四、密碼子
五、質粒拷貝數
第二節 大腸埃希菌工程菌的構建策略
一、包涵體異源蛋白的表達
二、分泌型異源蛋白的表達
三、融合型異源蛋白的表達
四、寡聚型異源蛋白的表達
五、整合型異源蛋白的表達
六、蛋白酶抗性或缺陷型表達系統的構建
第三節 將外源基因導入大腸埃希菌的方法
一、轉化作用
二、外源基因通過噬菌體轉導進入受體細胞
第四節 重組異源蛋白的體外復性活化
一、包涵體的溶解與變性
二、異源蛋白的復性與重摺疊
第五節 基因工程菌的不穩定性及對策
一、質粒不穩定性的表現
二、提高質粒穩定性的方法
第六節 基因工程菌的高密度發酵
一、高效表達系統的構建
二、培養環境的選擇
三、構建產乙酸能力低的工程化宿主菌
四、構建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌
第七節 基因工程藥物的質量控制
一、生物材料的質量控制
二、培養過程的質量控制
三、純化過程的質量控制
四、目標產品的質量控制
五、產品的保存
第八節 大腸埃希菌基因工程製藥的案例
一、基因工程菌的組建
二、基因工程干擾素的製備
第七章 酵母菌基因工程
第一節 外源基因在酵母菌中高效表達的原理
一、DNA複製起始區
二、選擇標記
三、整合介導區
四、有絲分裂穩定區
五、表達盒
第二節 酵母菌的宿主系統
一、提高重組蛋白表達產率的突變宿主菌
二、抑制超糖基化作用的突變宿主菌
三、減少泛素依賴性蛋白降解作用的突變宿主菌
四、內源性蛋白酶缺陷型突變宿主菌
第三節 酵母菌的載體系統
一、釀酒酵母的2μ環狀質粒
二、乳酸克魯維酵母的線型質粒
三、果蠅克魯維酵母的環狀質粒
四、含ARS的YRp和YEp
五、含CEN的YCp
六、穿梭載體
第四節 將外源基因導入酵母菌的方法
一、聚乙二醇介導的酵母轉化
二、金屬陽離子介導的酵母轉化
三、轉化質粒在酵母細胞中的命運
第五節 酵母菌基因工程製藥的案例
一、基因工程菌的組建
二、基因工程乙型肝炎疫苗的製備
第八章 植物基因工程
第一節 植物基因工程載體及其構建
一、植物基因工程載體的分類
二、植物基因工程載體的構建
第二節 將外源基因導入植物細胞的方法
一、物理方法
二、生物學方法
第三節 植物表達
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