內容簡介
《獸用診斷試劑及應用》一書由河南農業大學田克恭教授、洛陽普泰生物技術有限公司鄧均華博士共同組織多位從事獸用診斷試劑及動物疫病防控領域的專家、學者,結合各自研究工作,參考大量國內外近期新文獻,歷經兩年撰寫而成 全書分14章,從獸用診斷試劑生物活性原料,獸用ELISA類試劑,獸用免疫色譜類試劑,獸用化學發光免疫分析系統,獸用PCR類試劑,其它常見獸用診斷技術,新型獸用診斷技術,獸用診斷技術標準,產品註冊、生產、質量控制及臨床應用等方面進行了全面系統的闡述 本書內容翔實,既具有理論指導性,又具有實踐操作性,可作為農業院校動物醫學和動物藥學專業、科研機構、第三方檢測機構、獸藥企業等從事教學、研發、檢驗、生產等人員的良好教學參考書和工具書
作者簡介
田克恭,教授,長期從事動物疫病防控技術研究,先後供職於軍事醫學科學院、中國動物疫病預防控制中心、普萊柯生物工程股份有限公司、河南農業大學,率先確診高致病性豬藍耳病,分離鑒定43種動物病原998株,創制針對24種病原的1100余株單克隆抗體;發表研究論文339篇,其中SCI論文85篇,主編專著7部;制定國家和行業標準26項,授權發明專利126件;獲獸用疫苗及診斷試劑新獸藥證書41個(一類1個,二類10個),產品在全國推廣應用,有力保障了養殖業持續健康發展。獲國家科技進步二等獎、中國專利金獎、談家楨生命科學獎產業化獎、中華農業科技獎一等獎、河南省科技進步一等獎等省部級一等獎以上成果10余項。
目錄
第1章 緒論1
1 1我國養殖業發展現狀2
1 1 1養豬業2
1 1 2養禽業3
1 1 3牛羊養殖業4
1 2我國動物疫病流行現狀及防控策略5
1 2 1主要動物疫病流行現狀5
1 2 2我國動物疫病防控策略10
1 3獸用診斷試劑的發展歷程19
1 3 1獸用診斷試劑的發展史19
1 3 2我國獸用診斷試劑的行業現狀20
1 3 3我國獸用診斷試劑的發展趨勢22
主要參考文獻23
第2章 獸用診斷試劑生物活性原料的研製24
2 1抗原25
2 1 1抗原的定義與分類25
2 1 2天然抗原的研製27
2 1 3重組抗原的研製28
2 1 4合成多肽抗原的研製34
2 2抗體37
2 2 1抗體的定義與分類37
2 2 2多克隆抗體的研製38
2 2 3單克隆抗體的研製40
2 2 4基因工程抗體的研製43
2 3工具酶45
2 3 1工具酶的定義與分類45
2 3 2從天然材料中提取酶47
2 3 3基因工程製備酶49
2 4生物活性原料的純化55
2 4 1生物活性原料的預處理55
2 4 2生物活性原料的初純56
2 4 3生物活性原料的精純59
2 4 4應用62
2 5生物活性原料的保存與質量控制63
2 5 1生物活性原料的保存63
2 5 2生物活性原料的質量控制64
主要參考文獻66
第3章 獸用ELISA類試劑的研製68
3 1概述69
3 2ELISA的基本原理和反應模式69
3 2 1直接ELISA70
3 2 2間接ELISA71
3 2 3競爭ELISA72
3 2 4夾心ELISA78
3 3酶標記物的製備81
3 3 1ELISA中常用酶及其底物系統81
3 3 2酶標記方法85
3 3 3酶標記物的純化與保存89
3 3 4酶標記物的質量評價91
3 3 5新型酶的研究進展92
3 4ELISA試劑盒的組成93
3 4 1固相系統93
3 4 2酶標系統96
3 4 3樣品系統97
3 4 4洗滌系統97
3 4 5對照系統98
3 4 6顯色系統99
3 5ELISA類試劑研製的基本原則100
3 5 1反應載體的選擇100
3 5 2緩衝體系的作用及常用緩衝體系100
3 5 3添加劑的作用及常用添加劑103
3 5 4生物活性原料的選擇105
3 5 5反應條件的優化106
3 6ELISA類試劑研發的關鍵點107
3 6 1靶標類型及方法選擇108
3 6 2質控品的建立109
3 6 3判界確定112
3 6 4性能評估115
3 7ELISA檢測中的常見問題118
3 7 1樣品收集118
3 7 2實驗環境和儀器119
3 7 3試劑使用和保管120
3 7 4加樣品及反應試劑120
3 7 5溫育120
3 7 6洗板121
3 7 7顯色121
3 7 8讀值121
3 7 9結果判定122
3 7 10常見問題及分析122
3 8ELISA技術展望123
3 8 1高靈敏度檢測123
3 8 2高通量檢測125
3 8 3自動化檢測125
主要參考文獻125
第4章 獸用化學發光免疫分析系統的研製127
4 1概述128
4 2化學發光免疫分析的原理及應用128
4 2 1化學發光原理128
4 2 2化學發光技術在免疫檢測中的應用129
4 3化學發光免疫分析系統組成135
4 3 1全自動化學發光免疫分析系統135
4 3 2化學發光免疫分析系統關鍵技術指標142
4 4獸用化學發光免疫反應試劑144
4 4 1化學發光技術在獸用檢測領域的優勢145
4 4 2獸用化學發光免疫診斷試劑研製流程148
4 4 3應用實例——非洲豬瘟病毒抗體檢測方法(化學發光法)151
4 5化學發光免疫分析系統研發的關鍵點155
4 5 1化學發光技術中的包被工藝155
4 5 2化學發光技術中的標記工藝157
4 5 3系統整合技術159
主要參考文獻161
第5章 獸用免疫色譜類試劑的研製162
5 1概述163
5 2免疫色譜試紙的結構165
5 2 1樣品墊165
5 2 2結合墊166
5 2 3色譜膜166
5 2 4吸收墊167
5 3免疫色譜試紙的檢測原理167
5 3 1直接法168
5 3 2間接法168
5 3 3競爭法169
5 4LFIA標記物169
5 4 1金納米顆粒170
5 4 2熒光素172
5 4 3磁納米顆粒175
5 4 4上轉換納米顆粒177
5 4 5其他標記材料180
5 5免疫色譜試劑研製的基本原則181
5 5 1樣品和檢測靶標的類型181
5 5 2免疫色譜試紙的檢測模式182
5 5 3試紙原料篩選與確定188
5 5 4生物活性原料的篩選與條件優化192
5 5 5緩衝體系的作用及常用緩衝體系194
5 5 6添加劑的作用及常用添加劑197
5 5 7試紙反應條件的優化197
5 6免疫色譜試劑研製的關鍵點199
5 6 1生物活性原料及其標記技術199
5 6 2蛋白印跡工藝203
5 6 3樣品墊處理206
5 6 4結合墊處理207
5 6 5反應系統的建立及優化207
5 6 6試紙貯存208
5 7免疫色譜檢測的常見問題209
5 7 1納米顆粒標記物常見問題及原因209
5 7 2假信號產生的原因210
5 7 3攔截線常見問題及原因211
5 7 4檢測靈敏度問題211
5 8免疫色譜技術展望212
5 8 1高靈敏度檢測212
5 8 2高通量檢測216
5 8 3數字化檢測217
主要參考文獻218
第6章 獸用PCR類試劑的研製221
6 1概述222
6 2PCR檢測技術的原理與分類224
6 2 1PCR的原理及基本概念225
6 2 2幾種常見PCR的原理與應用229
6 2 3熒光PCR的原理及基本概念234
6 2 4幾種常見熒光PCR的原理及應用236
6 3PCR試劑研發的基本原則245
6 3 1靶基因的選擇246
6 3 2引物的設計247
6 3 3探針類型和設計原則250
6 3 4引物探針的網絡驗證255
6 3 5熒光PCR的試驗誤差256
6 3 6內標類型及設置原則260
6 4PCR試劑研發的關鍵點262
6 4 1樣品採集、處理及核酸提取262
6 4 2對照品和樣品盤的製備及應用266
6 4 3絕對定量方法269
6 4 4相對定量方法273
6 4 5熒光RT-PCR反應體系279
6 5PCR試驗常見的問題289
6 6PCR技術展望290
主要參考文獻292
第7章 其他常見獸用診斷技術297
7 1凝集試驗298
7 1 1發展歷史298
7 1 2反應原理和分類298
7 1 3操作步驟和關鍵點300
7 1 4主要技術特點304
7 2沉澱試驗305
7 2 1發展歷史305
7 2 2反應原理和分類306
7 2 3操作步驟和關鍵點309
7 2 4主要技術特點314
7 3補體結合試驗315
7 3 1發展歷史315
7 3 2反應原理和分類315
7 3 3操作步驟和關鍵點317
7 3 4主要技術特點325
7 4中和試驗326
7 4 1發展歷史327
7 4 2反應原理和分類328
7 4 3操作步驟和關鍵點329
7 4 4主要技術特點332
7 5血凝和血凝抑制試驗332
7 5 1發展歷史333
7 5 2反應原理和分類333
7 5 3操作步驟和關鍵點334
7 5 4主要技術特點339
7 6間接免疫熒光試驗339
7 6 1發展歷史340
7 6 2反應原理340
7 6 3操作步驟和關鍵點340
7 6 4主要技術特點342
7 7核酸雜交技術342
7 7 1發展歷史343
7 7 2反應原理和分類344
7 7 3操作步驟和關鍵點347
7 7 4主要技術特點350
7 8核酸片段多態性分析350
7 8 1發展歷史350
7 8 2反應原理和分類351
7 8 3操作步驟和關鍵點358
7 8 4主要技術特點363
主要參考文獻366
第8章 新型獸用診斷技術369
8 1蛋白芯片技術370
8 1 1定義和分類370
8 1 2技術特點與應用現狀372
8 1 3產業化難點和關鍵點377
8 1 4發展趨勢378
8 2基因芯片技術380
8 2 1定義和分類380
8 2 2技術特點與應用現狀380
8 2 3產業化難點和關鍵點387
8 2 4發展趨勢389
8 3微流控技術389
8 3 1定義和分類390
8 3 2技術特點與應用現狀391
8 3 3產業化難點和關鍵點397
8 3 4發展趨勢397
8 4量子點技術398
8 4 1定義和分類398
8 4 2量子點的合成和原理400
8 4 3技術特點與應用現狀403
8 4 4產業化難點和關鍵點405
8 4 5發展趨勢410
8 5核酸等溫擴增技術410
8 5 1定義和分類410
8 5 2技術特點與應用現狀414
8 5 3產業化難點和關鍵點416
8 5 4發展趨勢417
8 6數字PCR技術418
8 6 1定義和分類418
8 6 2技術特點與應用現狀422
8 6 3產業化難點和關鍵點426
8 6 4發展趨勢427
8 7核酸適配體技術428
8 7 1定義和分類428
8 7 2技術特點與應用現狀430
8 7 3產業化難點和關鍵點436
8 7 4發展趨勢437
主要參考文獻439
第9章 獸用診斷技術國際標準442
9 1國際獸醫診斷標準概況443
9 1 1世界動物衛生組織的發展歷史444
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